(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210925875.7 (22)申请日 2022.08.03 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO: M 202 2137 202 2.02.21 (71)申请人 山东凤凰生物科技股份有限公司 地址 271000 山东省泰安市泰山区花园路 17号 (72)发明人 王静　单宝龙　李凤娟　刘敬兰　 李创　庄金丽　 (74)专利代理 机构 济南圣达知识产权代理有限 公司 372 21 专利代理师 周红英 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/36(2006.01)C12N 1/02(2006.01) C02F 3/34(2006.01) A62D 3/02(2007.01) A01N 63/22(2020.01) A01P 1/00(2006.01) A01P 3/00(2006.01) B09C 1/10(2006.01) A62D 101/04(2007.01) C02F 101/30(2006.01) C12R 1/10(2006.01) (54)发明名称 一株地衣芽孢杆菌B A1001、 驯化筛选方法及 其应用 (57)摘要 本发明公开了一株地衣芽孢杆菌B A1001、 驯 化筛选方法及其应用， 所述地衣芽孢杆菌 (Bacillus licheniformis)BA1001于2022年2月 21日保藏于中国典型培养物保藏中心， 保藏地 址： 中国武汉武汉大学， 保藏编号为CCTCC  NO:M  2022137； 本发明所述地衣芽孢杆菌BA1001对草 甘膦具有高的耐受性， 可耐受草甘膦浓度最高为 10000mg/L， 且对浓度为10000mg/L的草甘膦的降 解率高达83％以上； 本发明所述地衣芽孢杆菌 BA1001还对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌均有 很好的抑菌性能， 可开发 成相关微 生态制剂。 权利要求书1页 说明书5页 附图3页 CN 115109732 A 2022.09.27 CN 115109732 A 1.一株地衣芽孢杆菌(Bacillus  licheniformis)BA1001， 其特征在于， 所述地衣芽孢 杆菌(Bacillus  licheniformis)BA1001于2022年2月21日保藏于中国典型培养物保藏中 心， 保藏地址： 中国武汉武汉大 学， 保藏编号 为CCTCC NO:M 2022137。 2.权利要求1所述 地衣芽孢杆菌BA10 01的驯化筛 选方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： (1)菌株的筛选培养： 无菌条件下， 取经过预处理的黄芪根部样本置于含有草甘膦的LB 固体培养基中， 于 35～40℃静置 培养， 活化培 养至平板铺满单菌落； (2)菌株的分离纯化： 挑取单个菌落， 于含草甘膦的LB固体培养基上划线培养， 重 复2‑3 次， 直至平板 菌落形态一 致， 镜检无杂菌； (3)菌株的斜面培养： 挑单个菌落接种于含草甘膦的LB固体斜面培养基上， 于35～40℃ 培养活化至斜 面铺满菌体； (4)菌株的液体活化： 由斜面培养基 中挑取菌体接种于含草甘膦的LB 液体培养基中， 于 35～40℃、 10 0～200r/min条件下震荡培 养， 获得菌株培 养液； (5)菌株的驯化培养： 吸取菌株培养液转接至含草甘膦的MSM培养基中驯化培养， 筛选 出耐受性 最强的菌株， 并将驯化后的菌株进行斜 面培养， 置于4℃冰箱保存。 3.根据权利要求2所述的地衣芽孢杆菌BA1001的驯化筛选方法， 其特征在于， 步骤(1) 中黄芪根部样本的预处理方法为： 先用75％乙醇清理黄芪根部表面， 并在无菌条件下将黄 芪根打浆， 利用获得的均浆液进行后续分离 筛选。 4.根据权利要求2所述的地衣芽孢杆菌BA1001的驯化筛选方法， 其特征在于， 步骤(5) 中菌株的驯化培养具体为： 吸取菌株培养液转接到含草甘膦的MS M培养基中， 35～40℃， 100 ～200r/min震荡培养， 在相同条件下， 以500mg/L为间隔梯度， 依次由含低浓度草甘膦的MSM 培养基中接种于含高浓度草甘膦的MSM 培养基中， 筛 选获得高耐受性菌株。 5.一种调理剂， 其特 征在于， 包 含权利要求1所述的地衣芽孢杆菌BA10 01。 6.权利要求1所述的地衣芽孢杆菌BA1001或权利要求5所述的调 理剂在降解草甘膦中 的应用。 7.一种抑菌剂， 其特 征在于， 包 含权利要求1所述的地衣芽孢杆菌BA10 01。 8.权利要求1所述的地衣芽孢杆菌BA1001或权利要求7所述的抑菌剂在抑制金黄色葡 萄球菌和白色念珠菌中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115109732 A 2一株地衣芽孢杆菌 BA1001、 驯化筛选方 法及其应用 【技术领域】 [0001]本发明属于微生物技术领域， 具体涉及一株地衣芽孢杆菌BA1001、 驯化筛选方法 及其应用。 【背景技术】 [0002]草甘膦(glyphosate， N ‑膦酰基甲基甘氨酸)又称农达(Roundup)， 作为一种有机磷 类除草剂， 是目前应用最广、 产量最大的除草剂产品， 但 其降解缓慢， 长期使用对土壤、 水源 及其生态系统造成了严重影响。 [0003]目前， 草甘膦的降解方式主要有水解、 光化学降解、 生物降解等， 其中生物降解是 利用对草甘膦具有降解能力的微生物将农药残留转化分解， 因此生物降解对环境没有负面 影响， 且具有速度快、 成本低、 范围广、 效率高等优点。 自然界中存在很多能够降解其他有机 磷类的菌株， 但是这些菌株对草甘膦的降解能力有限， 因此， 筛选高效稳定的降解草甘膦菌 株对丰富 生物降解种子库资源， 推动微 生态改良剂的研究与开发具有重要的现实意 义。 【发明内容】 [0004]针对现有技术的缺陷， 本 发明的目的在 于， 提供一株对地衣芽孢杆菌BA100 1、 寻化 筛选方法及其应用， 所述 地衣芽孢杆菌BA10 01对草甘膦耐受性高， 且可以高效降解 草甘膦。 [0005]为了实现上述 技术效果， 本发明采用如下技 术方案： [0006]一株地衣芽孢杆菌(Bacillus  licheniformis)BA1001， 所述地衣芽孢杆菌 (Bacillus licheni formis)BA1001已于2022年2月21日保藏于 中国典型培养物保藏中心， 保藏地址： 中国武汉武汉大 学， 保藏编号 为CCTCC NO:M 2022137。 [0007]所述地衣芽孢杆菌(Bacillus  licheniformis)BA1001菌株来源于中药黄芪根部， 所述菌株的菌体形态为： 菌种呈浅白色， 长圆形、 芽孢囊不膨大， 边缘光滑、 无光泽、 不透明； 菌体呈杆状， 革兰氏染色呈 阳性。 [0008]本发明的第二目的在于， 提供所述地衣芽孢杆菌(Bacillus  licheniformis) BA1001的驯化筛 选方法， 具体包括如下步骤： [0009](1)菌株的筛选培养： 无菌条件下， 取经过预处理的黄芪根部样本置于含有草甘膦 的 LB固体培 养基中， 于 35～40℃静置 培养， 活化培 养至平板铺满单菌落； [0010](2)菌株的分离纯化： 挑取单个菌落， 于含草甘膦的LB 固体培养基上划线培养， 重 复 2‑3次， 直至平板 菌落形态一 致， 镜检无杂菌； [0011](3)菌株的斜面培养： 挑单个菌落接种于含草甘膦的LB固体斜面培养基上， 于35～ 40℃培养活化至斜 面铺满菌体； [0012](4)菌株的液体活化： 由斜面培养基中挑取菌体接种于含草甘膦的液体LB培养基 中， 于35～40℃、 10 0～200r/min条件下震荡培 养24h， 获得菌株培 养液； [0013](5)菌株的驯化培养： 吸取菌株培养液转接至含草甘膦的MSM培养基中驯化培养， 筛选出耐受性 最强的菌株， 并将驯化后的菌株进行斜 面培养， 置于4℃冰箱保存。说　明　书 1/5 页 3 CN 115109732 A 3