(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210766964.1 (22)申请日 2022.06.30 (71)申请人 新疆师范大学 地址 830054 新疆维吾尔自治区乌鲁 木齐 市沙依巴克区新医路102号 (72)发明人 曹希媛　李浩然　赵和平　赵惠新　 张经博　李金玉　李艳红　 热伊汗古丽·艾麦尔　杨军　 陈佳一　 (74)专利代理 机构 西安鼎迈知识产权代理事务 所(普通合伙) 6126 3 专利代理师 李振瑞 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/38(2006.01)C07K 7/06(2006.01) C12P 21/02(2006.01) C12R 1/125(2006.01) (54)发明名称 枯草芽孢杆菌J15高产抗霉枯草菌素的培养 基及其应用 (57)摘要 本发明提供枯草芽孢杆菌J  15高产抗霉枯 草菌素的培养基， 本发明采用优化后最佳培养基 以及所优选的最适发酵培养条件对黄粉虫抗菌 肽基因工程菌进行发酵培养， 结果表明本申请提 供的葡萄糖7.07g/L， 蛋白胨46.11g/L， 硫酸锰 2.21mM， 磷酸氢二钠50mM， L ‑丝氨酸5g/L 的最佳 培养基结合特定的应用条件与比未优化的基础 培养基条件下产量提高了4.2倍， 能够显著提升 脂肽类次生代谢产物抗霉枯草菌素的产率， 解决 抗霉枯草菌素的低产量困境， 为今后抗霉枯草菌 素研究应用奠定坚实的基础， 从而为实现脂肽抗 生素大规模生产、 商业化应用提供新的思路和科 学依据。 权利要求书1页 说明书10页 附图5页 CN 114958692 A 2022.08.30 CN 114958692 A 1.枯草芽孢杆菌J15高产抗霉枯草菌素的培养基， 其特征在于， 所述发酵培养基的包括 碳源、 氮源、 无机盐和微量元素、 外源氨基酸,所述 发酵培养基中的氮源为蛋白胨； 所述 发酵 培养基中的无机盐为磷酸氢二钠、 硫酸锰； 所述发酵培 养基中的外源氨基酸 为L‑丝氨酸。 2.如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌J15高产抗霉枯草菌素的培养基， 其特征在于， 所 述发酵培养基的组成为： 葡萄糖5 ‑10g/L， 蛋白胨30 ‑60g/L， 磷酸氢二钠0.5 ‑5mM， 硫酸锰 0.5‑5mM， L‑丝氨酸5g/L， 余 量是水。 3.如权利要求2所述的枯草芽孢杆菌J15高产抗霉枯草菌素的培养基， 其特征在于， 所 述发酵培养基的组成为： 葡萄糖7.07g/L， 蛋白胨46.11g/L， 硫酸锰2.21mM， 磷酸氢二钠 50mM， L‑丝氨酸5g/L， 余 量为水。 4.如权利要求1至权利要求3中任意一项所述的枯草芽孢杆菌J15高产抗霉枯草菌素的 培养基在提升枯 草芽孢杆菌J 15产抗霉枯 草菌素效率中的应用。 5.如权利要求4所述的枯草芽孢杆菌J15高产抗霉枯草菌素的培养基在提升枯草芽孢 杆菌J15产抗霉枯 草菌素效率中的应用， 其特 征在于， 采用如下步骤： 将抗霉枯草菌素产生菌BS  Z15用平板划线法接种到牛肉膏蛋白胨固体平板进行活化， 37℃培养12h后挑取单菌落接入基础培养基， 37℃、 200rpm培养12h后即为种子液。 将种子液 以10％(V/V)接种量接种到发酵培 养基中， 37℃、 20 0rpm/min培养24h。 6.如权利要求5所述的枯草芽孢杆菌J15高产抗霉枯草菌素的培养基在提升枯草芽孢 杆菌J15产抗霉枯草菌素效率中的应用， 其特征在于， 所述牛肉膏蛋白胨固体培养基配方： 牛肉膏5g/L， 蛋白胨10g/L， 氯化钠5g/L， 琼脂15g/L， pH  7.0。 7.如权利要求5所述的枯草芽孢杆菌J15高产抗霉枯草菌素的培养基在提升枯草芽孢 杆菌J15产抗霉枯草菌素效率中的应用， 其特征在于， 所述基础培养基配方： 葡萄糖10g/L， 牛肉膏5g/L， 氯化钠5 0mM， pH自然。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114958692 A 2枯草芽孢杆菌J15高产抗霉枯草菌素的培养基 及其应用 技术领域 [0001]本发明属于微生物发酵生物技术， 具体涉及一种枯草芽孢杆菌J15的发酵培养基 的技术领域， 更具体的涉及一种枯草芽孢杆菌J15高产抗霉枯草菌素的培养基及其应用的 技术领域。 技术背景 [0002]枯草芽孢杆菌具有生长快， 营养需求低， 对人和动 物安全等优点， 其产生的脂肽具 有两亲性结构， 包括亲水环肽和疏水脂肪酸链， 是由7～10个氨基酸(含2～ 4个D‑氨基酸)和 一个13～19个碳的β 羟基或氨基脂肪酸组成的小分子代谢产物， 枯草芽孢杆菌脂肽可分为 伊枯草菌素、 表面活性素和丰霉素三个大家族类。 [0003]由于特殊的结构特征， 脂肽类化合物通常具有多种生物活性， 包括抗真菌、 抗病 毒、 抗癌活性等。 除此之外， 脂肽类化合物还具有良好的理化性质， 如热稳定性 强、 耐有机溶 剂、 对蛋白酶K不敏感、 抗 紫外线、 可生物降解 等， 因此脂肽类化 合物具有广阔的应用前 景。 [0004]抗霉枯草菌素为伊枯草菌素同系物， 均属于环脂肽物质。 但抗霉枯草菌素环肽结 构中的八个氨基酸残基中有两个与伊枯草菌素序列不同， 在性质上较伊枯草菌素更稳定， 在抗真菌活性上比伊 枯草菌素更强。 [0005]作为菌株的次生代谢产物， 脂肽类化合物面临的低产量困境， 成为限制其研究和 应用的重要制约因素。 抗霉枯草菌素同样面临着产量低的问题， 菌株分泌天然抗霉枯草菌 素的产量极低， 且目前发现的能够分泌抗霉枯草菌素 的菌株也相对较少， 这极大地限制 了 其研究发展。 目前提高产量的方法主要有菌株改造和发酵条件优化两种策略， 相较之下， 发 酵条件优化是可行性较高的策略。 [0006]发酵条件中影响脂肽类化合物产量的关键因素是培养基成分， 并且前体底物供应 是提高脂肽类产量的重要参数。 碳源、 氮源、 无机盐、 微量元素等都对细胞的生长和次生代 谢产物的分泌息息相关。 前体底物为： L ‑谷氨酰胺、 D ‑天冬酰胺、 L ‑酪氨酸、 D ‑酪氨酸、 L ‑谷 氨酰胺、 L‑脯氨酸、 L‑丝氨酸和D‑丝氨酸。 因此， 基于枯草芽孢杆菌J15提供能够提高抗霉枯 草菌素的产率的发酵培 养条件， 将是抗霉枯 草菌素研究应用领域的突破点。 发明内容 [0007]针对现有技术中现有技术中尚无针对枯草芽孢杆菌 J15提用于提升抗霉枯草菌素 产率的相关培养基的报道的技术问题。 本发明旨在通过提供一种枯草芽孢杆菌J15的最佳 发酵培养基及其应用， 能够显著提升脂肽类次生代谢产物抗霉枯草菌素 的产率， 解决抗霉 枯草菌素 的低产量困境， 为今后抗霉枯草菌素研究应用奠定坚实的基础， 从而为实现脂肽 抗生素大规模生产、 商业 化应用提供新的思路和科 学依据。 [0008]为了实现本发明的目的， 本发明的技 术方案如下： [0009]本申请提供枯草芽孢杆菌J15高产抗霉枯草菌素的培养基， 所述发酵培养基 的包 括碳源、 氮源、 无机盐和微 量元素、 外源氨基酸。说　明　书 1/10 页 3 CN 114958692 A 3