(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221073273 6.2 (22)申请日 2022.06.27 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO： M202 2221 2022.03.09 (71)申请人 吉林省农业科 学院 地址 130033 吉林省长 春市净月开发区彩 宇大街13 63号 (72)发明人 李盛钰　吴兴宏　高岩松　杨舸　 高磊　赵子健　赵玉娟　胡楠　 (74)专利代理 机构 长春众邦菁华知识产权代理 有限公司 2 2214 专利代理师 于晓庆 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12P 33/20(2006.01)C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 植物乳植杆菌MB11及其在生物转化制备稀 有人参皂苷中的应用 (57)摘要 植物乳植杆菌MB11及其在生物转化制备稀 有人参皂苷中的应用， 涉及稀有人参皂苷制备领 域 ， 本 发 明 的 植 物 乳 植 杆 菌 (Lactiplantibacillusplantarum)MB11， 该菌株 已于2022年03月09日保藏于中国典型培养物保 藏中心， 保藏编号为： CCTCCNO： M2 022221。 本发明 以人参根粉提取的总皂苷提取物 为原料， 利用上 述食品级微生物植物乳植杆菌MB11发酵转化制 备生物活性较高的稀有人参皂苷， 并采用HPLC对 转化的稀有人参皂苷进行了鉴定。 本发明保证了 产物的安全性， 为乳酸菌发酵制备稀有人参皂苷 方法的建立和应用奠定 了一定基础。 权利要求书1页 说明书5页 序列表2页 附图2页 CN 115029279 A 2022.09.09 CN 115029279 A 1.植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus  plantarum)MB11， 其特征在于， 该菌株已于 2022年03月09日保藏于中国典型培 养物保藏中心， 保藏编号 为： CCTCC NO： M2022221。 2.如权利要求1所述的植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus  plantarum)MB11在生物 转化制备稀有人参皂苷中的应用。 3.根据权利要求2所述的应用， 其特征在于， 所制备的稀有人参皂苷分别为稀有人参皂 苷Rg6、 稀有人参皂苷F4、 稀有人参皂苷Rk3、 稀有人参皂苷Rh4、 稀有人参皂苷20(R) ‑Rg3、 稀 有人参皂苷 20(S)‑Rg3、 稀有人参皂苷CK、 稀有人参皂苷Rh2。 4.根据权利要求2所述的应用， 其特 征在于， 包括以下步骤： 将植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus  plantarum)MB11接种于液体MRS培养基， 37～ 45℃静置培养16～2 5h， 4～10℃、 4000～8000rpm离心5～10min， 收集菌体沉淀； 用发酵 灭菌 培养基水溶液悬浮， 调整活菌数为1.0 ×109～1.0×1010CFU/ml， 获得MB1 1菌悬液； 将人参根粉经80～100℃热水提取， 所得提取液经减压浓缩、 冷冻干燥后， 获得粗皂苷 粗提物， 再经D101大孔树脂柱层析， 以不同浓度乙醇洗脱， 收集洗脱液， 回收溶剂后进行冷 冻干燥获得 人参总皂苷提取物； 向液体发酵培养基中加入10～20g/L人参总皂苷提取物， 按接种量10～30ml/L接种 MB11菌悬液， 37～42℃静置发酵14～21天； 发酵结束后， 发酵产物于70℃低温减压浓缩， 经 冷冻干燥、 甲醇萃取、 离心后， 上清减压回收溶剂后进行冷冻干燥， 获得含有稀有人参皂苷 的干燥产物； 采用HPLC法对干燥产物进行鉴定 。 5.根据权利 要求4所述的应用， 其特征在于， 所述液体发酵培养基包括葡萄糖2～5g/L， 酵母浸粉1～3g/L， pH 6.0～7.0， 121℃灭菌15mi n。 6.根据权利要求4所述的应用， 其特征在于， 所述采用HPLC法对干燥产物进行鉴定的具 体操作流 程如下： 将含有稀有人参皂苷的干燥产物溶于甲醇， 经0.22 μm微孔滤膜过滤后用于HPLC色谱分 析： 色谱柱为Agilent  pursuit5 SB‑C18色谱柱， 进样量2 0 μL， 流速1mL/min， 柱温30℃， 检测 波长203nm。 流动相为A： 水， B： 乙腈， 0～40min  18～21％(B)； 40～42min  21～26％(B)； 42～ 46min 26～32％(B)； 46～66min  32～34％(B)； 66～71min  34～38％(B)； 71～77.70min   38.0～49.1％(B)； 77.70～82min  49.1％(B)； 82～83min49.1～50.6％(B)； 83～88min   50.6～59.6％(B)； 88～89.80min  59.6～65.0％(B)； 89.80～97min  65％(B)； 97～102min   65～75％(B)； 102～110min  75～85％(B)； 110～115min  85％(B)； 115～125min  85～18％ (B)； 125～13 0min 18.0％(B)。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115029279 A 2植物乳植杆菌MB1 1及其在生物转化制备稀有人参皂苷中的 应用 技术领域 [0001]本发明涉及稀有人参皂苷制备技术领域， 具体涉及一种植物乳植杆菌MB11及其在 生物转化制备稀有人参皂苷中的应用。 背景技术 [0002]人参(Panax  ginseng C.A.Meyer)冠百草， 是传统补益类中药之上品， 中药四百味 描述“人参味甘， 大补元气， 止咳生津， 调 容养卫”。 现代药理学对人参进行了广泛深入的研 究。 国家卫健委2012 年第17号公告批复人参根(5年及以下)为新资源食品原料， 允许人参应 用于食品， 极大地推动了人参食品产业的发展。 人参皂苷是人参主要的活性 成分。 稀有人参 皂苷是人参皂苷类成分中天然含量少、 生物活性高的一类化合物的总称， 通常是 由人参中 含量高的皂苷成分， 如Rc、 Rd、 Rb1、 Re等经热处理、 酸水解、 酶解和微生物发酵等方法制备。 稀有人参皂苷对神经系统、 心血管系统、 内分泌系统、 消 化系统均有良好的药理活性， 应用 前景十分广阔。 [0003]近年来， 利用微生物发酵转化制 备稀有人参皂苷的方法发展较快。 一些真菌和非 食用性微生物转化人参皂苷的能力虽强， 但存在安全性问题， 很难应用推广。 利用食品级微 生物， 如乳酸菌发酵人参制备稀有人参皂苷， 基于该方法的安全性和高效性备受关注和广 泛认可。 乳酸菌转化人参皂苷是其生长代谢过程中产生的糖苷水解酶， 如葡萄糖苷酶、 鼠李 糖糖苷酶等水解人参皂苷的糖苷键来制备稀有人参皂苷的。 而这种酶解作用因菌株产酶能 力不同而存在显著差异。 因此， 发酵转化制备稀有人参皂苷 能力强的乳酸菌菌株筛选显得 十分必要。 发明内容 [0004]有鉴于此， 本发明的目的是提供一种植物乳植杆菌MB11及其在生物转化制备稀有 人参皂苷中的应用。 [0005]本发明为 解决技术问题所采用的技 术方案如下： [0006]本发明的植物乳植杆菌(Lactiplantibacillus  plantarum)MB11， 该菌株已于 2022年03月09日保藏于中国典型培 养物保藏中心， 保藏编号 为： CCTCC NO： M2022221。 [0007]本发明的植物乳植杆菌(Lact iplantibacillus  plantarum)MB11在生物 转化制备 稀有人参皂苷中的应用。 [0008]作为优选的实施方式， 所制备的稀有人参皂苷分别为稀有人参皂苷Rg6、 稀有人参 皂苷F4、 稀有人参皂苷Rk3、 稀有人参皂苷Rh4、 稀有人参皂苷20(R )‑Rg3、 稀有人参皂苷20 (S)‑Rg3、 稀有人参皂苷CK、 稀有人参皂苷Rh2。 [0009]作为优选的实施方式， 包括以下步骤： [0010]将植物乳植杆菌(Lact iplantibacillus  plantarum)MB11接种于液体MRS培养基， 37～45℃静置培养16～2 5h， 4～10℃、 4000～8000rpm离心 5～10min， 收集菌体沉淀； 用发酵说　明　书 1/5 页 3 CN 115029279 A 3