(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210790067.4 (22)申请日 2022.07.06 (71)申请人 呼伦贝尔东北阜丰生物科技有限公 司 地址 021000 内蒙古自治区呼伦 贝尔市岭 东工业开发区 （扎兰屯） 开创大街 (72)发明人 刘世周　孙钦波　白红兵　赵杰　 关丹　李武红　海桐莹　汲生贵　 (74)专利代理 机构 北京领科知识产权代理事务 所(特殊普通 合伙) 11690 专利代理师 张丹 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12P 13/14(2006.01) C12R 1/15(2006.01) (54)发明名称 谷氨酸发酵菌的高温培 养工艺 (57)摘要 本发明属于生物 技术领域， 公开了谷氨 酸发 酵菌的高温培养工艺， 该工艺使用耐高温发酵培 养基进行发酵， 采用38℃以上的温度， 提高了菌 体浓度， 发酵效率 也相应提高。 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 CN 115125171 A 2022.09.30 CN 115125171 A 1.谷氨酸发酵菌的高温培 养工艺， 其包括如下步骤： 使用高温发酵培 养基进行培 养。 2.根据权利要求1所述的高温培养工艺， 其特征在于， 所述高温发酵培养基含有葡萄 糖， 乳糖， MnSO4·H2O， FeSO4·7H2O， MgSO4·7H2O， Na2HPO4·12H2O， KCl， VB1， 生物素， 生物氮 素， 甲硫氨酸。 3.根据权利要求2所述的高温培养工艺， 其特征在于， 所述高温发酵培养基含有葡萄 糖， 乳糖， MnSO4·H2O， FeSO4·7H2O， MgSO4·7H2O， Na2HPO4·12H2O， KCl， VB1， 生物素， 生物氮 素， 甲硫氨酸， 吐温 ‑80。 4.根据权利要求1 ‑3任其一所述的高温培养工艺， 其特征在于， 所述高温发酵培养基含 有： 葡萄糖80g/L， 乳糖5g/L， MnSO4·H2O 3mg/L， FeSO4·7H2O 3mg/L， MgSO4·7H2O 2g/L， Na2HPO4·12H2O 4g/L， KCl  2g/L， VB110mg/L， 生物素7 μg/L， 生物氮素2g/L， 甲硫氨酸0.6g/ L， 吐温‑80 0.2g/L。 5.根据权利要求1 ‑3任其一所述的高温培养工艺， 其特征在于， 所述高温发酵培养基的 组分为： 葡萄糖80g/L， 乳糖5g/L， MnSO4·H2O 3mg/L， FeSO4·7H2O 3mg/L， MgSO4·7H2O 2g/ L， Na2HPO4·12H2O 4g/L， KCl  2g/L， VB110mg/L， 生物素7μg/L， 生物氮素2g/L， 甲硫氨酸 0.6g/L， 吐温 ‑80 0.2g/L。 6.根据权利要求1 ‑5任其一所述的高温培养工艺， 其特征在于， 所述高温培养工艺包括 如下步骤： 将谷氨酸棒杆菌种子液接入到装有发酵培养基的发酵罐中进行发酵培养， 发酵 温度为32℃； 待发酵液OD600＝30时， 提高发酵温度为38 ‑39℃， 直至发酵结束； 整个发酵过程 中， 控制通风比1∶0.8， 搅拌转速200rpm， 溶氧 维持在20％， 流加葡萄糖溶液维持残糖为1％， 流加消泡剂消泡， 同时流加氨水调节发酵 液的pH值至7.2， 直至发酵 结束； 发酵总时间3 6h。 7.根据权利要求6所述的高温培养工艺， 其特征在于， 所述高温培养工艺包括如下步 骤： 将谷氨酸棒杆菌种子液按10％接种量接入装有发酵培养基的发酵罐中进行发酵培养， 发酵温度为32℃； 待发酵液OD600＝30时， 提高发酵温度为38.5℃， 直至发酵结束； 整个发酵 过程中， 控制通风比1∶0.8， 搅拌转速200rpm， 溶氧维持在20％， 流加800g/L的葡萄糖溶液维 持残糖为1％， 流加消泡剂消泡， 同时流加氨水调节发酵液的pH值至7.2， 直至发酵结束； 发 酵总时间3 6h。 8.根据权利要求6 ‑7任其一所述的高温培养工艺， 其特征在于， 所述谷氨酸棒杆菌种子 液按照如下 方法制备： 活化好的菌株用无菌水洗脱， 洗脱后全部接种到配置好的种子培养基中进行种子培 养； 所述的种子培养基为： 葡萄 糖40g/L， 玉 米浆干粉10g/L， KH2PO4 2g/L， MgSO4·7H2O0.8g/ L， MnSO4 5mg/L， FeSO4 5mg/L， 苏氨酸1g/L， VH10mg/L。 9.根据权利要求8所述的高温培养工艺， 其特征在于， 所述种子培养条件为： 温度维持 在32℃左右， 溶 氧控制在20％， 通过氨水控制pH在7.0左右。 10.一种用于温度敏感型谷氨酸棒杆菌 高温发酵的培养基， 其特征在于， 所述培养基的 组分如下： 葡萄糖80g/L， 乳糖5g/L， MnSO4·H2O 3mg/L， FeSO4·7H2O 3mg/L， MgSO4·7H2O  2g/L， Na2HPO4·12H2O 4g/L， KCl  2g/L， VB110mg/L， 生物素7 μg/L， 生物氮素2g/L， 甲硫氨酸 0.6g/L， 吐温 ‑80 0.2g/L。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115125171 A 2谷氨酸发酵菌的高 温培养工艺 技术领域 [0001]本发明属于生物技 术领域， 具体涉及谷氨酸发酵菌的高温培 养工艺。 背景技术 [0002]L‑谷氨酸， 又名α ‑氨基戊二酸， 是一种酸性氨基酸， 是世界上最大的氨基酸产 品， 其既可以缓解肝毒， 治疗肝昏迷症， 又是制取味精、 食品添加剂、 化妆品等产品的前体物质， 因此被广泛应用于食品、 医药、 化工和饲料 行业。 [0003]目前谷氨酸年产量近200多万吨， 各种产品出口50多个国家， 产值近200亿， 市场潜 力巨大， 前景广阔。 目前L ‑谷氨酸大规模工业化生产的方法是微生物发酵法， 发酵最常利用 的菌株为生物素亚适量型菌株和温度敏感型菌株， 其中由于温度敏感型菌株在产酸速率、 产酸量和糖酸转化率上相较于生物素亚适量菌株具有明显优势， 因此逐渐成为了各大发酵 公司备受关注的L ‑谷氨酸发酵菌株。 虽然温度敏感型谷氨酸棒杆菌潜力巨大， 但是在其发 酵过程中仍然存在着， 在发酵后 期菌体产酸能力下降， 发酵罐内溶氧不 足， 导致流加糖消耗 不完全， 转 化率降低， 发酵速率降低， 进 而造成能物浪费， 发酵周期提前进入半衰期等问题。 [0004]目前， 国内一般的生产厂家在谷氨酸发酵控制方面还在使用传统的发酵控制策 略， 如pH值的控制、 发酵通风量的控制、 发酵温度的控制、 发酵罐压力控制等， 这些控制策略 虽然对于谷氨酸的发酵很重要， 但是仅仅采用这几种控制方式对于谷氨酸产酸量、 产酸速 率和糖酸转化率日益提高的今天来说显然是不够的。 因此， 如何用更加精细的谷氨酸发酵 控制策略来取代传统的粗放的谷氨酸发酵控制， 从而使得谷氨酸在产酸量、 产酸速率以及 糖酸转化率方面取得突破就显得尤为重要。 谷氨酸发酵中后期因高温导致的菌体受抑制， 如何解除这种抑制， 继续 提升发酵速率和单 罐发酵产能， 是我们需要解决的技 术问题。 发明内容 [0005]本发明所要解决的技术问题在于提供谷氨酸发酵菌的高温培养工艺， 降低了谷氨 酸发酵中后期因高温导 致的菌体受抑制， 提升 了菌体浓度和发酵产能， 增 加了经济效益。 [0006]本发明是通过如下技 术方案来实现的。 [0007]谷氨酸发酵菌的高温培 养工艺， 其包括如下步骤： [0008]使用高温发酵培 养基进行培 养。 [0009]进一步地， [0010]所述高温发酵培养基含有葡萄糖， 乳糖， MnSO4·H2O， FeSO4·7H2O， MgSO4·7H2O， Na2HPO4·12H2O， KCl， VB1， 生物素， 生物 氮素， 甲硫氨酸。 [0011]优选地， [0012]所述高温发酵培养基含有葡萄糖， 乳糖， MnSO4·H2O， FeSO4·7H2O， MgSO4·7H2O， Na2HPO4·12H2O， KCl， VB1， 生物素， 生物 氮素， 甲硫氨酸， 吐温 ‑80。 [0013]更优选地， [0014]所述高温发酵培养基含有： 葡萄糖80g/L， 乳糖5g/L， MnSO4·H2O 3mg/L， FeSO4·说　明　书 1/4 页 3 CN 115125171 A 3