(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210780027.1 (22)申请日 2022.07.04 (83)生物保 藏信息 CGMCC NO.25034 2022.06.10 (71)申请人 京博农化科技有限公司 地址 256500 山东省滨州市博兴县经济开 发区 (72)发明人 刘海玉　郝春艳　韦能春　王祥传　 王成　 (74)专利代理 机构 山东舜源联合知识产权代理 有限公司 373 59 专利代理师 于晓晓 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12P 21/02(2006.01)C12N 9/24(2006.01) A01N 63/22(2020.01) A01P 1/00(2006.01) A01P 3/00(2006.01) C12R 1/07(2006.01) (54)发明名称 贝莱斯芽孢杆菌JBNH 101及其培养基、 发酵 产物制备方法、 制剂与应用 (57)摘要 本发明涉及一种贝莱斯芽孢杆菌JBNH  101 及其培养基、 发酵产物制备方法、 制剂与应用， 属 于微生物技术领域。 贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus   velezensis)JBNH  101， 其在 中国微生物菌种 保 藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为 CGMCC NO.25034， 保藏日期为2022年06月10日， 保藏机构地址： 北京市朝阳区北辰西路1号院3 号。 本发明贝莱斯芽孢杆菌JBNH  101高产表面活 性素和丰原素， 同时产高酶活壳聚糖酶。 本发明 的贝莱斯芽孢杆菌JBNH  101及其代谢物能够抑 制多种作物致病菌， 病害防治效果 突出。 权利要求书1页 说明书17页 附图7页 CN 115074287 A 2022.09.20 CN 115074287 A 1.一种贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus  velezensis)JB NH 101， 其特征在于， 其在中国微生 物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC  NO.25034， 保藏日期为2022年 06月10日， 保藏机构地址： 北京市朝阳区北辰西路1号院3号。 2.一种用于如权利 要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌JBNH  101的发酵培养基， 其特征在于， 所述的发酵培养基包括重量百分比的以下物质： 蔗糖1.0％～7.0％， 豆饼粉 水解物1.0％～ 4.0％， L ‑亮氨酸0.3％～2.0％， K2HPO4·3H2O 0.5％～1.5％， MgSO4·7H2O0.05％～ 0.075％， MnSO4·H2O 0.1％～1.0％， F eSO4 0.01％～0.12％， 其 余为水。 3.一种如权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌JBNH  101在制备脂肽和/或壳聚糖酶中的 应用。 4.一种脂肽的制备方法， 其特征在于， 将如权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌JBNH101 接种于培养基中进行发酵， 从发酵 液中分离得到所述的脂肽。 5.如权利要求 4所述的制备 方法， 其特 征在于， 所述脂肽包括表面活性素和丰原素。 6.一种壳聚糖酶的制备方法， 其特征在于， 将如权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌JBNH   101接种于 培养基中进行发酵， 从发酵 液中分离、 纯化得到所述的壳聚糖酶。 7.如权利要求6所述的制备方法， 其特征在于， 所述壳聚糖酶为一种内切酶， 它能将胶 体壳聚糖水解成聚合度为2 ～20的低聚糖。 8.一种如权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌JBNH  101在防治作物根部真菌和/或细菌 病害中的应用。 9.如权利要求8所述的应用， 其特征在于， 所述真菌包括尖孢镰刀菌(Fusarium   oxysporum)、 腐皮镰刀菌(Fusarium  solani)、 丝核菌(Rhizoctini a)、 灰葡萄孢(Botrytis   cinerea)、 大丽轮枝菌(Verticillium  dahliae)、 葱鳞葡萄孢(Botrytis  squamosa)、 禾谷 镰刀菌(Fusarium  graminearum)、 枝状镰刀菌(Fusarium  virguliforme)、 蔓延疫霉 (Phytophthora  infestans)、 寄生疫霉(Phytophthora  parasitica)、 大豆疫霉 (Phytophthora  sojae)、 辣椒疫霉(Phytophthora  capsici)、 肉桂疫霉(Phytophthora   cinnamon)、 烟草疫霉(Phytopht hora nicotianae)、 核盘菌(Sclerotinia  sclerotiorum)、 小核盘菌(Sclerotinia  minor)、 银斑核盘菌(Sclerotinia  homeocarpa)或黄曲霉 (Aspergillus  Favus)； 所述细菌包括假单胞菌(Pseudomonas  spp.)、 茄科雷尔氏菌 (Ralstonia  solanacearum)、 欧文氏菌属(Erwinia  spp.)或黄单胞菌属(Xanthomonas   spp.)。 10.一种生防制剂， 其特征在于， 包含如权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌JBNH  101和/ 或其发酵产物。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115074287 A 2贝莱斯芽孢杆菌JBNH  101及其培养基、 发酵产物制备方 法、 制 剂与应用 技术领域 [0001]本发明涉及微生物技术领域， 具体涉及贝莱斯芽孢杆菌JBNH  101及其培养基、 发 酵产物制备 方法、 制剂与应用。 背景技术 [0002]多年以来， 国内种植业由于复种指数高、 化学农药的不合理使用、 肥料过量施用等 问题， 造成耕地质量下降、 土壤中病原菌的数量和种类不断增加、 病原菌耐药性增强， 导致 土传真菌、 细菌等病害频发、 混发。 每年 都会给全国范围内的粮食、 果蔬、 中药材等生产造成 巨大的经济损失。 探索更加 安全、 有效、 可持续的土传真菌、 细菌病害的防治方法成为行业 迫切需要解决 的难题。 生物防治 具有绿色环保， 安全高效等特点， 符合农业可持续 发展的要 求。 [0003]芽孢杆菌属由于能够产生多种抑菌活性代谢物、 促生物质、 有益酶类， 以及具备易 定殖、 抗逆性强等特点， 在植物防病促生制剂的研究和开发中占有重要地位。 枯草芽孢杆 菌、 多粘类芽孢杆菌、 解淀粉芽孢杆菌等已作为 生物防治菌株实现商业 化生产和应用。 [0004]然而， 尽管国内外一些生物杀菌剂已实现应用， 但本领域仍需要针对靶标病害和 病原体的特异性， 继续寻找、 开发更加有效的生物防治产品。 同时， 考虑到菌剂产品容易受 到各种生物和非生物因素的影响， 需要稳定和改良其功效。 发明内容 [0005]针对现有技术中存在的上述不足， 本 发明提供一种莱斯芽孢杆菌 JBNH 101及其培 养基、 发酵产物制备方法、 制剂与应用， 以解决上述技术问题。 本发明通过提供一种贝莱斯 芽孢杆菌突变株及应用方法用于预防和减轻植物病害， 尤其是土传真菌病害和细菌病害， 来满足本领域的需求。 本发明的贝莱斯芽孢杆菌JBNH  101能够有效的提高了表面活性素 (surfacti n)、 丰原素(fengyci n)的产量， 同时能产生壳聚糖酶来抑制病原菌的生长 。 [0006]第一方面， 本发 明提供一种贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus  velezensis)JBNH  101； 其 在中国微生物菌种保藏管 理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC  NO.25034， 保藏日 期为2022年06月10日， 保藏机构地址： 北京市朝阳区北辰西路1号院3号。 [0007]一种用于贝莱斯芽孢杆菌 JBNH 101的发酵培养基， 所述的发酵培养基包括重量百 分比的以下物质： 蔗糖1.0％～7.0％， 豆饼粉水解物1.0％～4.0％， L ‑亮氨酸0.3％～ 2.0％， K2HPO4·3H2O 0.5％～1.5％， M gSO4·7H2O 0.05％～0.075％， MnSO4·H2O 0.1％～ 1.0％， FeSO4 0.01％～0.12％， 其 余为水。 [0008]优选的， 所述的培养基为： 蔗糖4.0％， 豆饼粉水解物2.0％， L ‑亮氨酸0.5％， K2HPO4·3H2O 0.8％， MgSO4·7H2O 0.075％， MnSO4·H2O 0.2％， FeSO4 0.07％， 其 余为水。 [0009]第二方面， 本发明提供一种贝莱斯芽孢杆菌JBNH  101的培育方法， 包括以下步骤： [0010]挑取一环斜面菌种接种于20mL  LB种子培养基， 在35℃～40℃， 150～200rpm条件说　明　书 1/17 页 3 CN 115074287 A 3