(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211085035.0 (22)申请日 2022.09.06 (71)申请人 天津中医药大学 地址 301617 天津市 静海区团泊新城西区 鄱阳湖路10号 (72)发明人 颜晓晖　张成玉　路启伟　张红梅　 (74)专利代理 机构 天津市北洋 有限责任专利代 理事务所 12 201 专利代理师 陆艺 (51)Int.Cl. C12P 33/00(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 食醚红球菌在转化胆固醇生产4-雄烯二酮 的应用 (57)摘要 本发明公开了食醚红球菌在转化胆固醇生 产4‑雄烯二酮的应用， 实验证明， 食醚红球菌具 有高效转化胆固醇生成4 ‑雄烯二酮的作用， 产物 易于萃取分离， 终产物纯度高。 经检测， 4 ‑雄烯二 酮的得率为0.62mg/L以上。 获得4 ‑雄烯二酮的方 法操作简便， 绿 色环保， 价格低廉。 权利要求书1页 说明书4页 附图4页 CN 115537446 A 2022.12.30 CN 115537446 A 1.食醚红球菌在转 化胆固醇生产4 ‑雄烯二酮的应用。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特 征是包括如下步骤： 1)菌株的培养： 向种子培养基中接种食醚红球菌(Rhodococcusaetherivorans)， 培养， 得种子培养液； 2)将步骤1)获得的种子培养液接种到发酵培养基中， 再加入胆固醇溶液， 转化， 得到含 有产物4‑雄烯二酮的转 化液。 3.根据权利要求2所述的应用， 其特征是步骤1)菌株的培养为： 向种子培养基 中接种食 醚红球菌(Rhodococ cusaetherivorans)， 培 养， 得OD600值1.2‑2.0的种子 培养液。 4.根据权利要求2所述的应用， 其特征是步骤2)为： 将步骤1)获得的种子培养液按照 (6‑12)v/v％的接种量接种到发酵培养基中， 再加入胆固醇溶液， 使胆固醇的终浓度为0.2 ‑ 0.8g/L， 在28 ‑32℃、 180 ‑220rpm的条件下转化72 ‑96h， 得到含有产物4 ‑雄烯二酮的转化液， 所述胆固醇溶 液的溶剂为有机溶剂。 5.根据权利要求 4所述的应用， 其特 征是所述有机溶剂为乙醇、 甲醇或二甲基亚砜。 6.根据权利要求2或3所述的应用， 其特征是所述种子培养基的组成为： 葡萄糖20g/L， 酵母提取物1.0g/L， 胰蛋白胨7g/L， K2HPO4 0.5g/L， KH2PO4 0.5g/L， MgSO4·7H2O 0.5g/L， 谷 氨酸钠1.0g/L； 余 量为水， 调pH 至7.2， 灭菌 。 7.根据权利要求2或4所述的应用， 其特征是所述发酵培养基的组成为： 葡萄糖20g/L， 酵母提取物8.0g/L， 尿素7.0g/L， K2HPO4 0.5g/L， KH2PO4 0.5g/L， MgSO4·7H2O 1.0g/L， 谷氨 酸钠1.0g/L； 余 量为水， 调pH 至7.2， 灭菌 。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115537446 A 2食醚红球菌在转化胆固醇生产4 ‑雄烯二酮的应用 技术领域 [0001]本 发 明 涉 及 微 生 物 技 术 领 域 ，更 具 体 地 涉 及 一 种 食 醚 红 球 菌 (Rhodococ cusaetherivorans)在转 化胆固醇生产4 ‑雄烯二酮的应用。 背景技术 [0002]甾体药物是指分子结构中含有环戊烷骈多氢菲母核的药物。 甾体药物在化学药物 体系中占有重要地位， 是仅次于抗生素 的第二大类药物。 在维持生命、 机体发育、 免疫调节 等方面有着极其重要的作用， 故被称为 “生命的钥匙 ”。 按药理作用， 其可以分为皮质激素及 性激素两大类型。 皮质激素主要用于治疗各种炎症、 自身免疫性疾病、 变态反应性疾病等， 另外还可维持人体内水和电解质的平衡等， 比如消炎药地塞米松、 治疗过敏性皮炎药氟轻 松等。 近年来还发现甾体药物有抗癌、 治疗骨质疏松与抗HIV感染等疗效， 例如新型抗癌药 物阿比特龙。 随着甾体药物治疗疾病的范围不断扩 大， 其在医药市场上具有广阔的前景。 目 前全球生产的甾体类药物已超过400多种， 其中最主要的是甾体激素类药物， 在甾体药物中 极具潜力。 [0003]4‑雄烯二酮(4 ‑AD)是合成重要甾体激素类药物不可替代的中间体， 几乎所有甾体 激素药物都可以以4 ‑AD为起始原料进行生产。 通过微生物转化胆固醇、 甾醇等廉价易得的 甾体类化合物 来合成甾体激素类药物或甾药关键中间体4 ‑AD， 对于甾体激素类药物的生产 具有十分重要的意义。 同时， 微生物 转化法具有化学合成不可比拟的优点， 相较于化学法具 有高效、 专 一性强、 反应条件温和、 不依赖于有机溶剂、 环境友好等优点。 常用于降解甾体化 合物的微生物有分枝杆菌属(Mycobacterium  spp.)、 红球菌属(Rhodococcus  spp.)、 链霉 菌属(Streptomyc es spp.)、 诺卡氏菌属(Nocardiaspp.)等， 研究较多的为 分枝杆菌属的菌 株。 目前， 尚未有用红球菌属降解胆固醇生成4 ‑雄烯二酮的报道。 发明内容 [0004]本发明的目的是克服现有技术的不足， 提供一种食醚 红球菌在转化胆固醇生产4 ‑ 雄烯二酮的应用。 [0005]本发明的技 术方案如下： [0006]食醚红球菌在转 化胆固醇生产4 ‑雄烯二酮的应用。 [0007]上述应用， 包括如下步骤： [0008]1)菌株的培养： 向种子培养基中接种食醚红球菌(Rhodococcusaetherivorans)， 培养， 得种子 培养液； [0009]2)将步骤1)获得的种子培养液接种到 发酵培养基中， 再加入胆固醇溶液， 转化， 得 到含有产物4 ‑雄烯二酮的转 化液。 [0010]步 骤 1 ) 菌 株 的 培 养 优 选 为 ：向 种 子 培 养 基 中 接 种 食 醚 红 球 菌 (Rhodococ cusaetherivorans)， 培 养， 得OD600值1.2‑2.0的种子 培养液。 [0011]步骤2)优选为： 将步骤1)获得 的种子培养液按照(6 ‑12)v/v％的接种量接种到发说　明　书 1/4 页 3 CN 115537446 A 3