(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210778392.9 (22)申请日 2022.06.30 (71)申请人 哈尔滨市灵扩科技发展 有限公司 地址 150000 黑龙江省哈尔滨市经开区哈 平路集中区平顺 街55号1栋1楼 A159 (72)发明人 包洪彬　 (74)专利代理 机构 黑龙江立超同创知识产权代 理有限责任公司 23217 专利代理师 黄亮 (51)Int.Cl. C12N 1/36(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12N 1/16(2006.01) C12N 1/14(2006.01) C12N 1/04(2006.01)A23K 10/18(2016.01) A23K 50/10(2016.01) C12R 1/15(2006.01) C12R 1/225(2006.01) C12R 1/125(2006.01) C12R 1/72(2006.01) C12R 1/645(2006.01) (54)发明名称 高效培植畜禽肠道益 生菌剂的制备方法 (57)摘要 高效培植畜禽肠道 益生菌剂的制备方法， 它 涉及一种畜禽肠道益生菌剂的制备方法。 本发明 的目的是要解决现有生物饲料益生菌剂在动物 肠道中的存活率低， 无法抑制肠道内有害菌群的 繁殖的问题。 制备方法： 一、 驯化， 得到厌氧混合 驯化后白地霉、 厌氧混合驯化后产朊假丝酵母、 厌氧混合驯化后谷氨酸棒杆菌、 厌氧混合驯化后 消化乳杆菌和厌氧混合驯化后枯草芽孢杆菌； 二、 固液结合发酵， 得到固体发酵产物； 三、 干燥， 得到高效培植畜禽肠道益生菌剂。 优点： 2h内益 生细菌和益生酵母菌能够共同进入对 数生长期， 实现益生细菌和益生酵母快速定值。 本发明主要 用于制备高效培植畜禽肠道益 生菌剂。 权利要求书2页 说明书5页 CN 114921399 A 2022.08.19 CN 114921399 A 1.高效培植畜禽肠道益 生菌剂的制备 方法， 其特 征在于它是按以下步骤制备的： 一、 驯化： ①、 单独培养： 对白地霉进行液体培养， 培养至菌液中活菌数不低于109个/mL 为止， 得到白地霉菌种悬液； 对谷氨酸棒杆菌进行液体培养， 培养至菌液中活菌数不低于 109个/mL为止， 得到谷氨酸棒杆菌菌种悬液； 对消化乳杆菌进行液体培养， 培养至菌液 中活 菌数不低于109个/mL为止， 得到消化乳杆菌菌种悬液； 对枯草芽孢杆菌进行液体培养， 培养 至菌液中活菌数不低于109个/mL为止， 得到枯草芽孢杆菌菌种悬液； 对产朊假丝酵母进行 液体培养， 培养至菌液中活菌数不低于108个/mL为止， 得到产朊假丝酵母菌种悬液； ②、 混 合厌氧培养： 将白地霉菌种悬液、 谷氨酸棒杆菌菌种 悬液、 消化乳杆菌菌种悬液、 枯草芽孢 杆菌菌种悬液和产朊假丝酵母菌种悬液混合， 然后在温度为35～39℃下厌 氧培养5d～10d， 得到厌氧培养后混合菌液； ③、 分离： 对厌氧培养后混合菌液进行菌种分离， 得到一次厌氧 混合培养后白地霉、 一次厌氧混合培养后产朊假丝酵母、 一次厌氧混合培养后谷氨酸棒杆 菌、 一次厌 氧混合培养后消化乳杆菌和一次厌氧混合培养后枯草芽孢杆菌； ④、 以一次厌氧 混合培养后白地霉、 一次厌氧混合培养后产朊假丝酵母、 一次厌氧混合培养后谷氨酸棒杆 菌、 一次厌氧混合培养后消化乳杆菌和一次厌氧混合培养后枯草芽孢杆菌分别代替白地 霉、 产朊假丝酵母、 谷氨酸棒杆菌、 消化乳杆菌和枯草芽孢杆菌按照步骤一 ①至③重复操 作， 共厌氧培养4～6次， 得到厌氧混合驯化后白地霉、 厌氧混合驯化后产朊假丝酵母、 厌氧 混合驯化后谷氨酸 棒杆菌、 厌氧混合驯化后消化乳杆菌和厌氧混合驯化后枯 草芽孢杆菌； 二、 固液结合发酵： ①、 分别对厌氧混合驯化后白地霉、 厌氧混合驯化后谷氨酸棒杆菌、 厌氧混合驯化后消化乳杆菌和厌氧混合驯化后枯草芽孢杆菌进行液体培养， 培养至菌液中 活菌数不低于109个/mL为止， 得到厌氧混合驯化后白地霉种子液、 厌氧混合驯化后谷氨酸 棒杆菌种子液、 厌氧混合驯化后消化乳杆菌种子液和厌氧混合驯化后枯草芽孢杆菌种子 液； 对厌氧混合驯化后产朊假丝酵母， 培养至菌液 中活菌数不低于108个/mL为止， 得到厌氧 混合驯化后产朊假丝酵母种子液； 将厌氧混合驯 化后白地霉种子液、 厌氧混合驯 化后产朊 假丝酵母种子液、 厌氧混合驯 化后谷氨酸棒杆菌种子液、 厌氧混合驯 化后消化乳杆菌种子 液和厌氧混合驯化后枯草芽孢杆菌种子液混合后进行液态通风发酵， 发酵至菌液中活菌数 为108个/mL， 得到液体发酵物； ②、 将液体发酵物进行固体扩大培养， 培养至干重情况下固 体培养基中总活菌种不低于4 ×109个/g， 且干重情 况下固体培养基中厌氧混合驯化后产朊 假丝酵母的活菌数不低于4 ×108个/g， 得到固体发酵产物； 三、 干燥： 对固体发酵产物进行低温真空干燥， 且低温真空干燥中保证益生菌的灭活率 控制在5％以内， 生物酶及维生素的灭活率控制在2％以内， 得到高效培植畜禽肠道益生菌 剂。 2.根据权利要求1所述的高效培植畜禽肠道益生菌剂的制备方法， 其特征在于步骤一 ①中所述白地霉的保藏编号： ACCC20016， 所述产朊假丝酵母的保藏编号： ACCC20060， 所述 谷氨酸棒杆菌的保藏编号： ACCC10159， 所述消化乳杆菌的保藏编号： ACCC10173， 所述枯草 芽孢杆菌的保藏编号： AC CC10114。 3.根据权利要求2所述的高效培植畜禽肠道益生菌剂的制备方法， 其特征在于步骤一 ②中将等体积的 白地霉菌种悬液、 谷氨酸棒杆菌菌种悬液、 消化乳杆菌菌种悬液、 枯草芽孢 杆菌菌种悬液和产朊假丝酵母菌种悬 液进行混合。 4.根据权利要求3所述的高效培植畜禽肠道益生菌剂的制备方法， 其特征在于步骤一权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114921399 A 2②中在温度为37℃下厌氧培 养7d， 得到厌氧培 养后混合菌液。 5.根据权利要求4所述的高效培植畜禽肠道益生菌剂的制备方法， 其特征在于步骤一 ④中共厌氧培 养5次。 6.根据权利要求1所述的高效培植畜禽肠道益生菌剂的制备方法， 其特征在于步骤二 ①中所述液态通风发酵过程中厌氧混合驯化后白地霉种子液、 厌氧混合驯化后产朊假丝酵 母种子液、 厌氧混合驯 化后谷氨酸棒杆菌种子液、 厌氧混合驯 化后消化乳杆菌种子液和厌 氧混合驯化后枯 草芽孢杆菌种子液的接种量相等， 接种量 为50～80mL/ 500mL。 7.根据权利要求6所述的高效培植畜禽肠道益生菌剂的制备方法， 其特征在于步骤二 ②中所述液态 通风发酵相关工艺条件： 温度为35～40℃， 发酵液pH为7～8， 通气比为1:(0.5 ～1.5)， 发酵 罐罐压为0.02MPa～0.0 3MPa。 8.根据权利要求7所述的高效培植畜禽肠道益生菌剂的制备方法， 其特征在于步骤二 ②中所述固体扩大培 养过程中， 液体发酵物的接种量 为50～80mL/10g。 9.根据权利要求8所述的高效培植畜禽肠道益生菌剂的制备方法， 其特征在于步骤二 ①中所述固体扩 大培养相关工艺条件： 温度为35～40℃， 发酵液pH为7～8， 通气比为1:(0.5 ～1.5)， 发酵 罐罐压为0.02MPa～0.0 3MPa。 10.根据权利要求10所述的高效培植畜禽肠道益生菌剂的制备方法， 其特征在于步骤 三中所述低温真空干燥相关工艺条件： 温度为50～70℃， 真空度为 ‑0.09kPa～0.03kPa， 干 燥时间8h～ 24h。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114921399 A 3